Evaluation of stallion sperm motility with ImageJ using a cell phone camera and a light microscope / [Avaliação da motilidade espermática de garanhões com ImageJ usando-se câmera de celular e microscópio óptico]

This study aimed to determine the accuracy of assessing stallion sperm motility using a light microscope, a cell phone camera, and a free computer-assisted semen analysis (FCASA) package for ImageJ. The total motility of frozen (n=22) and cooled (n=48) equine semen was determined by FCASA and compared to the results of subjective visual analysis (SVA) by two technicians. Frozen samples were also evaluated by a commercial computer-assisted semen analysis (CCASA) system. The Friedman test revealed no significant differences (P>0.05) between cooled samples analyzed by FCASA (38.0) and SVA (technician 1, 40.0; technician 2, 40.0), nor between frozen samples analyzed by FCASA (23.36 ± 15.9), SVA (25.5 ± 18.8 and 25.8 ± 18.5), and CCASA (25.2 ± 18.3). However, mean FCASA results were underestimated by 7.2% compared with CCASA. The correlation between FCASA and CCASA was significant and strong (P<0.0001, r=0.95). Chi-squared tests indicated that FCASA provided similar results (P=0.14) to the reference method (CCASA), but SVA had lower accuracy (P=0.04). ImageJ analysis of cell phone videos captured under a light microscope can be used for estimation of stallion sperm motility with comparable accuracy to commercial systems.(AU)

O objetivo deste estudo foi testar as configurações necessárias para avaliar a motilidade espermática total de garanhões, mediante o uso de ImageJ, microscópio óptico e câmera de celular. Os valores de motilidade total das amostras de sêmen equino congeladas (22) e refrigeradas (48) foram comparados por análise visual (SVA) e pelo plugin do ImageJ (CASAF). Amostras congeladas também foram comparadas por um CASA comercial (CCASA). O teste de Friedman não resultou em diferença estatística (P>0,05) entre as 48 amostras analisadas com CASAF (38,0) e SVA de dois avaliadores (40,0 e 40,0). A comparação das 22 amostras congeladas entre CASAF (23,36±15,9), SVA (25,5±18,8 e 25,8±18,5) e CCASA (25,2±18,3) também não resultou em diferença estatística, sendo que a média dos resultados obtidos com CASAF subestimou a obtida com o CCASA em 7,2%. A correlação entre CASAF e CCASA foi significativamente elevada (r=0,95, P<0,0001). O teste de qui-quadrado resultou em proporção de acertos semelhantes entre o CASAF e o CCASA (P=0,14), enquanto SVA resultou em proporção diferente (P=0,04), indicando menor acurácia. O uso de microscópio óptico e câmera de celular foi útil para obter vídeos de sêmen de garanhões a serem analisados com ImageJ, proporcionando resultados de motilidade total equiparáveis a sistemas comerciais.(AU)

Bovine semen thermoresistance tests and their correlation with pregnancy rates after fixed-time artificial insemination / Testes de termorresistência do sêmen bovino e sua correlação com taxas de prenhez após inseminação artificial em tempo fixo

The objective of the study was to determine whether or not there is a correlation between thermoresistance tests (TT) after semen thawing and pregnancy rate (PR) after fixed-time artificial insemination (FTAI). Four different TT were performed on ten samples used for AI; a rapid test (RTT) (30min / 46°C) and three slow tests (STT): STT1 (60min/38°C), STT2 (180min/38°C), and STT3 (300min/38°C). Two hundred and fifteen multiparous crossbred cows were submitted to FTAI under the following protocol: on day zero (d0) the animals received a P4 device +EB; on d7 PGF2α; on d8 P4 was removed and eCG+EC were administered; IATF was performed on d10. Three gestational diagnoses (G D) were performed on d40, d70 and d120. The mean sperm motility (%) in RTT and STTs were 19.84±6.13, 28.55±10.48, 17.62±5.87 and 8.63±3.46, respectively, and TP in the three DG 61.86%, 57.67%, and 55.81%, respectively. Through Person test a significant negative correlation (P< 0.05) was found between STT2 and PR at 60 days (r= -0.644) and between STT3 and all TPs (r= -0.774, -0.752, 0.748). It was concluded that TT parameters are not able to determine correlation between semen quality and TP.(AU)

O objetivo do presente estudo foi determinar se há ou não correlação entre testes de termorresistência (TT) após descongelamento do sêmen e taxa de prenhez (TP) após inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Quatro diferentes TT foram realizados nas 10 amostras utilizadas para a IA; um teste rápido (RTT) (30min/46°C) e três testes lentos (STT): STT1 (60min/38°C), STT2 (180min/38°C) e STT3 (300min/38°C). Duzentas e quinze vacas cruzadas multíparas foram submetidas à IATF sob o seguinte protocolo: no dia zero (d0), os animais receberam um dispositivo de P4+EB; em d7, PGF2α; em d8, retirou-se P4 e eCG+EC administrados; no d10, foi realizada IATF. Três diagnósticos gestacionais (DG) foram feitos, em d40, d70 e d120. As médias de motilidade espermática (%) em RTT e STTs foram 19,84±6,13, 28,55±10,48, 17,62±5,87 e 8,63±3,46, respectivamente, e TP nos três DG 61,86%, 57,67% e 55,81%, respectivamente. Por meio do teste de Person, uma correlação negativa significativa (P<0,05) foi encontrada entre os resultados de STT2 e PR aos 60 dias (r=-0,644) e entre STT3 e todas TPs (r=-0,774, -0,752 e -0,748). Concluiu-se que parâmetros de TT não são capazes de determinar correlação entre qualidade do sêmen e TP.(AU)

Viability of ovine spermatozoa collected from epididymides stored at 18°-25°C for 48 hours post mortem / Viabilidade dos espermatozoides ovinos coletados de epidídimos armazenados a 18°-25°C até 48 horas após a morte

The objectives of this study were to verify the time during which viable ovine spermatozoa could be recovered from the cauda epididymis kept at ambient temperature (18-25°C). Sperm collected in an artificial vagina (AV) were used as control. Spermatozoa samples were collected with an AV and from epididymis at 0 (G0), 6 (G6), 12 (G12), 24 (G24), and 48 (G48) hours post mortem. Total motility (TM), progressive motility (PM), hypo-osmotic membrane integrity test (HOST) and morphological changes were assessed. TM decreased (P<0.05) from 24 hours post mortem (70.0±1.9%) compared to AV (86.4±1.0%). PM decreased (P<0.05) from 12 hours after death (31.3±4.0%) compared to AV group (73.2±1.4%). The percentage of viable cells in HOST decreased (P<0.05) in the G48 (60.0±8.9%). Spermatozoa recovery was lower (P<0.05) 48 hours after death (2064.2±230.7 x 106 spermatozoa) compared to G0(2623.6±288.4 x 106 spermatozoa). In conclusion, under the conditions of this study, it would be possible to use epididymal spermatozoa recovered up to 24 hours after death for artificial insemination or in vitro fertilization; however, fertility trials are necessary to prove this hypothesis.(AU)

Os objetivos deste estudo foram avaliar o período pelo qual era possível recuperar espermatozoides ovinos viáveis da cauda de epidídimos mantidos em temperatura ambiente (18-25°C). O sêmen coletado em vagina artificial (AV) foi utilizado como controle. Os espermatozoides foram coletados dos epidídimos à zero hora (G0), às seis (G6), 12 (G12), 24 (G24) e 48 (G48) horas post mortem. A motilidade total (TM), a motilidade progressiva (PM), a integridade de membrana plasmática em solução hiposmótica (HOST) e a morfologia espermática foram avaliadas. A TM diminuiu (P<0,05) a partir de 24 horas após a morte (70,0±1,9%) comparado ao sêmen coletado em AV (86,4±1,0%). A PM diminuiu (P<0,05) a partir de 12 horas após a morte (31,3±4,0%) comparado ao grupo AV (73,2±1,4%). A porcentagem de espermatozoides viáveis no HOST diminuiu (P<0,05) no G48 (60,0±8,9%). A recuperação espermática foi menor (P<0,05) 48 horas após a morte (2064,2±498,1 x 106 espermatozoides) comparado ao G0 (2298,4±288,4 x 106 espermatozoides). Em conclusão, nas condições deste estudo, é possível utilizar espermatozoides epididimários recuperados até 24 horas após a morte para inseminação artificial ou fertilização in vitro, porém testes de fertilidade são necessários para comprovar essa hipótese.(AU)

Contribuiçäo ao estudo do puerpério de vacas leiteiras através de acompanhamento clínico-reprodutivo e determinaçäo de progesterona pelo radioimunoensaio / A field study of postpartum period of dairy cows by rectal palpation and progesterone profiles in the milk by radioimmunoassay

O trabalho foi desenvolvido utilizando-se 18 vacas leiteiras recém-paridas, da bacia leiteira de Curitiba (PR). Os animais eram semanalmente examinados por palpaçäo retal e aspectos de involuçäo uterina e atividade ovariana eram verificados. O início dos exames ocorreu em torno do 7º dia pós-parto (p.p.) e estendeu-se até o 49º. Concomitantemente foram colhidas dos animais amostras de leite da ordenha matinal a cada quatro dias, para posterior determinaçäo de progesterona, iniciando-se no 9º dia p.p. e estendendo-se até a 7º semana. As dosagens da progesterona (P4 subscrito) no leite magro foram realizadas pelo radioimunoensaio (RIA) em fase sólida. Os achados da pesquisa revelaram que a menor concentraçäo de P4 subscrito, detectada no leite foi de 0,01 ng/ml e a maior de 3,64 ng/ml, o 1º estro p.p. ocorreu no 28,5º dia e a detecçäo do 1º corpo lúteo (CL) teve lugar no 34,5º dia, o intervalo entre o estro e a 1º elevaçäo de P4 subscrito luteal foi em média de 5,5 dias, o intervalo parto/involuçäo uterina deu-se no 24,1º dia, o 1º corpo lúteo p.p. gerou período da dominância de P4 subscrito de apenas 11,5 dias e a concentraçäo média de P4 subscrito do 1º CL p.p. foi de 1,9 ng/ml, o 1º estro p.p. foi silencioso em 61,1 por cento dos casos e o percentual de anestro dos animais durante o período da pesquisa foi de 33,3 por cento

Contribuiçäo ao estudo do diagnóstico de gestaçäo em Capra hircus, através da histologia e citologia do epitélio vaginal / Gestation diagnostic in Capra hircus, through histological and cytological analysis of the vaginal epithelium

O experimento objetivos estudar as diferentes características do epitélio vaginal de 55 cabras que, através de exame, conduzissem ao diagnóstico de gestaçäo. Os animais foram divididos em dois grupos, sendo o lº constituído de 35 animais submetidos a induçäo hormonal do estro. Cada fêmea desse grupo foi tratada com esponja vaginal impregnada com 50 mg de medroxiprogesterona, a qua] permanecem no interior da vagina durante 10 dias. No 8º dia foram administradas 500 UI de gonadotrofina coriônica humana (via submucosavulvar) e 250 µg de cloroprostenol (via intramuscular). O grupo controle, composto por 25 animais, permaneceu sem qualquer tratamento. Procedeu-se à observaçäo do estro, após a retirada das esponjas, sendo as fêmeas cobertas por monta natural dirigida. As coletas do material iniciaram-se no 20º dia pós cobertura, sendo repetidas a cada 10 dias, totalizando 8 por fêmea. O material para a citologia foi colhido com espátulas, na regiäo anterior da vagina e corado pela técnica de Papanicolaou. As amostras para a histologia vaginal foram retiradas por biópsia da mesma regiäo e coradas com HE e PAS com e sem digestäo enzimática. Os exames histológicos comprovaram diferenças significativas quanto à espessura do epitélio e composiçäo da camada de superficie do epitélio vaginal. Os animais näo-gestantes apresentaram 8 a 10 camadas e superfície composta por células do tipo intermediário alto e/ou superficial, enquanto as gestantes manifestaram epitélio composto por apenas 4 a 5 camadas e células do tipo intermediário baixo na camada superficial, tornando possível diferenciar animais em gestaçäo e näo-gestaçäo por esse método. Nos exames citológicos evidenciaram-se células dos tipos intemediário baixo, parabasal e cuboidal em ambos os grupos, näo sendo possível diagnosticar gestaçäo, anestro ou diestro

Perfis bioquímicos e imunológicos no período peripartal de vacas leiteiras com e sem retençäo de placenta / Biochemical and immunological profiles during the parturition period in dairy cows with and without placental retention

Foram determinados alguns perfis bioquímicos e imunológicos em 16 vacas holandesas com retençäo de placenta (RP) e 23 sem retençäo (NRP) de 241 partos observados. A alimentaçäo dos animais era baseada em forragens cultivadas no inverno e veräo, silagem de milho, feno e concentrado com 18,0 por cento de proteína bruta e 70,0 por cento de nutrientes digestíveis totais. As determinaçöes dos componentes plasmáticos no período peripartal (dias -15, -5, dia do parto, +3 e +5) revelaram maiores concentraçöes de colesterol (p < 0,01), fósforo (p < 0,01), fosfatase alcalina (p < 0,05), desidrogenase láctica (p < 0,05), aspartatoaminotransferase, uréia, fosfatase ácida e menores níveis de cálcio em vacas RP. As proteínas totais estiveram dentro dos padröes fisiológicos em ambos os grupos. Os níveis de imunoglobulinas demonstraram a incapacidade das vacas RP de produzir IgM, IgG sanguíneas (p < 0,001) e IgA no colostro e no leite (p < 0,01) quando comparadas às vacas NRP. As RP apresentaram, no dia da parturiçäo, quadro de neutrofilia, eosinofilia, monocitose e linfocitose, revelando imunodepressäo periférica, quando comparadas com as NRP. Observaram-se complicaçöes nas vacas RP, com 87,5 por cento de endometrite e 62,5 por cento de mastite aguda, demonstrando que estas eram mais susceptíveis. Os resultados reforçam a existência de relaçäo estreita entre a produçäo de imunoglobulinas, número de leucócitos, retençäo de placenta, inflamaçäo do útero e da glândula mamária, tornando possível a previsäo de retençäo dos anexos fetais 15 dias antes do parto nas vacas de leite